必知干貨—DAB染色液的使用方法及注意事項

　　必知干貨—DAB染色液的使用方法及注意事項

　　DAB染色液用于免疫組化染色，應(yīng)用在Dako 自動染色系統(tǒng)上。

　　DAB染色液的使用方法

　　1.DAB顯色液配制

　　10mM Tris-HCl (pH7.6) 9mL +DAB (diaminobezidin 3，3-二氨基聯(lián)苯胺) +0.3%(W/V) NiCl2 或CoCl2 1mL ,顯色時加入5-10mL 30%H2O2 混勻后立即使用

　　2. 顯色

　　準備好含有待測蛋白的固相膜：包括電泳、轉(zhuǎn)印、封阻、一抗(或生物素)處理、辣根過氧化酶(HRP)標記的二抗(或鏈霉親和素)處理、清洗等步驟。

　　3.加入適量的DAB顯色液，鋪滿整個固相膜表面(可按比例增減)。

　　4. 置于平式搖蕩儀上，在室溫下孵育2至5分 鐘，避免光照(暗室操作)，直至棕褐色沉淀出現(xiàn)。

　　5.用鑷子夾起固相膜，放進無離子水里清洗。

　　6.空氣中晾干。

　　7. 拍照記錄 。

　　DAB染色液的注意事項

　　1. DAB溶液應(yīng)低溫密封保存。如有結(jié)晶析出，應(yīng)確保結(jié)晶溶解再行使用;

　　2. 顯色工作液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，新鮮配制的工作液應(yīng)為無色或淺棕色，如顏色過深，請勿使用;

　　3. DAB在常溫下不穩(wěn)定，每次取用后均應(yīng)及時加蓋密封放回冰箱，以免因DAB分解影響實驗，或因滲漏造成實驗環(huán)境污染;

　　4. DAB有潛在致突變作用，操作時應(yīng)注意穿戴好防護用具。

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