酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)的種類及原理

　　酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)的種類及原理

　　酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)是一種基于抗原-抗體特異性結(jié)合和酶催化顯色的高靈敏度檢測(cè)技術(shù)，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷?。其核心原理是通過固相載體(如聚苯乙烯微孔板)固定抗原或抗體，結(jié)合酶標(biāo)記的抗體/抗原，通過顯色反應(yīng)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物質(zhì)的定性與定量分析?。

　　一、ELISA的主要類型及原理?

　　直接ELISA?

　　原理?：抗原直接包被在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一抗直接檢測(cè)目標(biāo)抗原?。

　　特點(diǎn)?：操作簡(jiǎn)單，但靈敏度較低(1-10 ng/mL)，適用于高豐度抗原檢測(cè)(如病毒顆粒、純化蛋白)?。

　　間接ELISA?

　　原理?：先包被抗原，加入一抗后，再通過酶標(biāo)記的二抗放大信號(hào)?。

　　特點(diǎn)?：信號(hào)強(qiáng)度提升5-10倍，靈敏度達(dá)0.1-1 ng/mL，適用于抗體檢測(cè)(如傳染病診斷、疫苗接種效果評(píng)估)?。

　　夾心ELISA?

　　原理?：使用兩種抗體(捕獲抗體和檢測(cè)抗體)夾心結(jié)合目標(biāo)抗原，酶標(biāo)記檢測(cè)抗體顯色?。

　　特點(diǎn)?：靈敏度最高(0.01-0.1 ng/mL)，適用于復(fù)雜樣本中的微量蛋白(如細(xì)胞因子、腫瘤標(biāo)志物)?。

　　競(jìng)爭(zhēng)ELISA?

　　原理?：樣本抗原與標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合有限抗體，信號(hào)強(qiáng)度與樣本抗原濃度成反比?。

　　特點(diǎn)?：適用于小分子檢測(cè)(如激素、藥物)，靈敏度達(dá)0.001-0.01 ng/mL?。

　　二、ELISA的通用原理?

　　固相包被?：抗原或抗體吸附于固相載體(如96孔板)，保持免疫活性?。

　　酶標(biāo)記?：抗體或抗原與酶(如HRP、AP)偶聯(lián)，保留免疫活性和酶活性?。

　　顯色檢測(cè)?：酶催化底物(如TMB)生成有色產(chǎn)物，通過比色法定量?。

　　三、應(yīng)用場(chǎng)景對(duì)比?

　　類型 適用目標(biāo) 典型應(yīng)用場(chǎng)景

　　直接ELISA 高豐度抗原 病毒檢測(cè)、純化蛋白定量?

　　間接ELISA 抗體 HIV抗體篩查、疫苗接種評(píng)估?

　　夾心ELISA 微量蛋白 細(xì)胞因子(IL-6)、腫瘤標(biāo)志物?

　　競(jìng)爭(zhēng)ELISA 小分子(激素/藥物) 藥物監(jiān)測(cè)、過敏原檢測(cè)?

　　四、技術(shù)優(yōu)化方向?

　　靈敏度提升?：夾心法通過雙抗體結(jié)合減少干擾，競(jìng)爭(zhēng)法優(yōu)化小分子檢測(cè)特異性?。

　　操作簡(jiǎn)化?：直接法步驟減少50%，適合高通量篩選?。

　　注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。

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